如何进行药物的含量测定方法与验证？

药物的含量:指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的重要标准。

可供药物含量测定的分析方法:

(1)容量分析法

①优点:操作简便，结果准确，方法耐用性高。

②缺点:方法缺乏专属性。

③适用:适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。

(2)光谱分析法

①优点:简便，快速，灵敏度高，并具有-一定的准确度。②缺点:方法专属性稍差。

③适用:适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。

(3)色谱分析法

①优点:高灵敏度与高专属性，并具有一定的准确度。

②缺点:结果计算需要对照品。

③适用:适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。3、为确保分析结果的可靠性，要求分析方法应准确、稳定、耐用。

•方法选择中的供试品因素

-化学原料药的含量测定首选容量分析法

-药物制剂的含量测定首选色谱分析法

-药物制剂的定量检查首选光谱分析法

•含量测定方法须准确、稳定、耐用

第一节 定量分析方法的分类与特点

一  容量分析法:

•基本术语

-滴定：将滴定剂通过滴管滴入待测溶液中的过程

-滴定剂：浓度准确已知的试样溶液

-指示剂：滴定分析中能发生颜色改变而指示终点的试 剂

-滴定终点：滴定分析中指示剂发生颜色改变的那一点 （实际）

-化学计量点：滴定剂与待测溶液按化学计量关系反应 完全的那一点（理论）

-滴定误差：滴定终点与化学计量点不一致产生的误差

•特点

-方法简便易行

-方法耐用性高

-测定结果准确

-方法专属性差

•适用范围：较多用于化学原料药物的含量 测定

•有关计算:

-滴定度：

每1 ml某摩尔浓度的滴定液所相当的 被测药物的重量。中国药典用mg表示

-滴定度的计算

-含量的计算

/直接滴定法:

/所配制滴定液浓度与规定浓度不一致时：

/间接滴定法：生成物滴定法

/简接滴定法：剩余量滴定法

二、光谱分析法：

•紫外-可见分光光度法(200〜400〜760nm)

-朗伯-比耳定律

-E：单位液层厚度时的吸收度。有两种表示法：

/摩尔吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1mol/L, 厚度为1cm时的吸收度。用e表示。

/百分吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1%

(W/V),厚度为1cm时的吸收度。用E比表示。

-特点与适用范围

/简便易行

/灵敏度高，可达10-4g/ml〜10-7g/ml。

/准确度较高，相对误差为2%〜5%。

/专属性较差

/较少应用于原料药含量测定，多用于制剂的定量检 查。

-仪器校正与检定

/波长：常用仪器中制:丁的486.02nm与656.10nm谱 线校正，或用钦玻璃的尖锐吸收峰。

/吸光度的准确度：与规定的吸收系数比较。

/杂散光的检查

/对溶剂的要求：截止波长

/测定法：波长扫描与吸光度读数

-含量测定方法

/对照品比较法

/吸收系数法

/计算分光光度法

/比色法

•荧光分析法

-特点与适用范围

/灵敏度高,可达 1010g/mH1012g/ml.

/浓度太大会有“自熄灭”作用，故适用于低浓度的 溶液。

/干扰因素多，须做空白试验。

/取样少，方法快速。衍生化试剂提高了适用范围

-干扰的排除

/溶剂：进一步纯化溶剂，空白试验

/溶液：适当的浓度，减少杂质，降低溶氧，调节pH

/玻璃量器：高洁净度

/温度：稳定的温度

-含量测定

/相对定量方法测定

/线性范围较窄

式中：Ci为供试品溶液的浓度，Cr为对照品溶液的浓度，Ri为供试品溶液 的读数，Rib为供试品溶液试剂空白的读数，Rr为对照品溶液的读数，Rrb 为对照品溶液试剂空白的读数。

三、色谱分析法：

・特点与适用范围

-高灵敏度

-高专属性

-高效能与超音速度

-适用于药物制剂，尤其复方制剂的含量测定。

•分类

-依据分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、 分子排阻色潜等

-依据分离方式：纸色谱法，薄层色谱法，柱色谱法， 气相色谱法，高效液相色谱法等

•高效液相色谱法

-药品标准对HPLC方法改变的要求

-对仪器的一般要求：

-色谱柱：填料，孔径与粒径，柱直径，温度，pH等

-检测器：通用型检测器与选择性检测器，对流动相 的要亲

-流动相：反相系统与正相系统

-系统适用性试验

-色谱柱的理论塔板数

・色谱峰的分离度

・色谱系统的重复性:

・色谱峰的拖尾因子

d1为极大峰至峰前沿之间的距离。T应在0.95-1.05之间。

-测定法：

1、外标法：一点法；两点法；工作曲线法

2、内标法

•气相色谱法

-检测器、固定液及特殊指定的色谱柱材料不能更换

-对仪器的一般要求

-载气

-色谱柱填料，柱管材质，固定液

-检测器种类，使用温度

-进样方式

-系统适用性试验

-测定法：多釆用内标法

第二节 样品分析的前处理方法

样品分析的前处理方法

•在分析含金属或卤素、氮、硫、磷等元素 的有机药物前，需进行适当的药品前处理。

•分类

-不经有机破坏的前处理方法

-经有机破坏的前处理方法

样品分析的前处理方法

•不经有机破坏的前处理方法

-直接测定法——含金属或C-M不牢固的有机金属药物

•配位滴定法

•氧化还原滴定法

经水解后测定法一卤素联脂肪碳链（溶于适当溶剂再水解）

-碱水解后测定法

•酸水解后测定法

-经氧化还原后测定法——卤素联芳环牢固（一般用于测碘）

•经有机破坏的前处理方法

-湿法破坏

•硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法

•硝酸-高氯酸法

•硝酸-硫酸法

•其它湿法

-干法破坏

•高温炽灼法

•氧瓶燃烧分解后测定法

-硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法

•将含氮药物与硫酸在凯氏定氮烧瓶中共热，药物分子 中有机结构被氧化分解（亦称“消解”或“消化”） 成二氧化碳和水，有机结合的氮则转变为无机氮，并 写过量的硫發结合另寵磋氢程及硫發铉，经氢童化钠 碱化后释放出氮气，并随水蒸气馅出，用祖酸渣液或 定墨的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定疲滴是。

-高温炽灼法

-将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化，使有机结 构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐， 以供分析。根据分析对象与目的不同，常加无水碳酸 钙、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。

-氧瓶燃烧法

第三节药品质量标准分析方法验证

药品质量标准分析方法验证

•方法验证的目的

•需验证的分析项目：鉴别试验；杂质定量 或限度检查；含量测定等

•验证内容：准确度；精密度；专属性；检 测限/定量限；线性及范围；耐用性等

1、准确度

•含量测定方法的准确度

-原料药的含量测定

-制剂的含量测定

•杂质定量测定方法的准确度

-使用杂质对照品

-缺少杂质对照品

•数据要求

2、精密度

•标准偏差（SD）与相对标准偏差（RSD）

•验证内容:重复性/中间精密度/重现性

•数据要求

3、专属性

•鉴别反应

•含量测定和杂质测定

-阴性对照

-阳性对照

-纯度测试

4、检测限/定量限

•检测限常用方法

-目视法：非仪器法

-信噪比法：色谱法

-标准偏差法：光谱法

•定量限：信噪比要求不同

•数据要求

5、线性及范围

•线性

-回归方程

-相关系数

•范围

-原料药和制剂含量测定

-制剂含量均匀度检查

-溶出度或释放度中的溶出量测定

-特殊元素含量测定

-杂质测定

六、耐用性

•耐用性

•典型的变动因素

-被测溶液

-环境因素

-液相色谱法中典型因素

-气相色谱法中典型因素

7、验证内容的选择

•非定量分析方法

•定量分析方法

•微量定量分析方法

①已有重现 性验证， 不需验证 卷间精密

②如一种方 法不够专 属，可用 其他分析 方法予以 补充

③视具体情 况予以验证

8、药品质量标准中分析方法验证示例

•阿司匹林及其片剂的药品质量标准

-鉴别:

•化学鉴别法

•红外光谱法

-检查

•溶液的澄清度

•游离水杨酸

•溶出度

-含量测定

•酸碱滴定法

•高效液相色谱法